Aislamiento de receptores estrogénicos de úteros de coneja por centrifucación simple: efecto del carbón dextrano, etanol y soluciones Tampon Tris-HCl (pH8.0) y fosfato (pH. 7.4)Trabajo Especial.

Abstract

Se ensaya la posibilidad de hacer la separación de receptores estrogénicos uterinos por centrifugación simple, utilizando uteros de coneja cuyos extractos citosolicos fueron suspendidos en soluciones Tampon TRIS-HCl o de fosfato. Durante el proceso se evaluó el efecto del Carbón-Dextrano y/o del Etanol como recursos para la adsorción o solubilización del exceso de Estradiol endógeno presente en el tejido, con el propósito de obtener receptores libres de la hormona. El análisis de los resultados y la escogencia del procedimiento se hace por evaluación cualitativa, comparando las gráficas de porcentaje de enlace obtenidas con las curvas ideales esperadas. Los resultados obtenidos permiten las siguientes conclusiones: la solución Buffer TRIS-HCl, Sacarosa 0.25M, pH 8.0, es más adecuada para el ensayo de competencia radio-receptor que la de Fosfato pH 7.4. El incremento de la fuerza iónica de la solución Tampón conlleva a una pérdida de afinidad, por los receptores, del 17-B Estradiol. El Etanol, por encima de una concentración del 10 por ciento, afecta drásticamente la naturaleza de los receptores. Aparentemente, la descongelación de los citosoles o la congelación por períodos prolongados afecta la viabilidad del ensayo. Aparentemente, el lavado previo de los receptores con Carbón-Dextrano mejora las condiciones de la competencia protéíca radio-receptor. Más...