Producción de proteínas recombinantes del plasma seminal bovino de interés en procesos de criopreservación espermática

Abstract

Desde hace algunas décadas, la ganadería colombiana ha empezado a involucrar técnicas biotecnológicas para la optimización de procesos reproductivos con el fin de mejorar su competitividad y sostenibilidad. En este sentido, el grupo Reproducción Animal del Trópico de AGROSAVIA ha dedicado parte de sus esfuerzos hacia el desarrollo de suplementos a base de proteínas del plasma seminal bovino, que ayuden a mitigar el impacto que tiene la criopreservación sobre la integridad y funcionamiento de los espermatozoides. De acuerdo con lo anterior, esta propuesta plantea la producción recombinante, a través de sistemas procariotas, para dos proteínas: Espermadhesinas 1, también conocida como aSFP y Osteopontina (OPN). Estas proteínas han sido reconocidas por su papel protector en el espermatozoide bovino y su relación con la interacción espermatozoide- ovocito. Para esto, las secuencias genéticas de cada proteína fueron insertadas en plásmidos de Escherichia coli inducibles por IPTG, que contenían marcadores de selección por antibióticos y una cola de seis histidinas (H6). Se evaluó la expresión de las proteínas bajo diferentes condiciones (concentraciones de IPTG y temperatura), y se encontró que la mejor expresión de aSFP-H6 se evidenció a 37 °C y 0.01 mM de IPTG, mientras las mejores condiciones de expresión para OPN-H6 fueron 37 °C con IPTG de 0.1 mM. La aSFP-H6 obtenida, fue purificada a través de columnas de afinidad a la histidina y se realizó un bioensayo para evaluar la calidad seminal post-descongelación después de la adición de aSFP-H6 en diferentes concentraciones (7.5 µg, 15 µg y 30 µg x 106 espermatozoides). Estos análisis mostraron que la adición de aSFP-H6 disminuye notoriamente la motilidad espermática, efecto que se incrementa al aumentar la cantidad de aSFP-H6. Más...