Tipificación molecular por PCR-RFLPs de cepas Trypanosoma sp. aisladas en campo y evaluación de ganados de la Orinoquia colombiana

Abstract

En este estudio se presentan los primeros resultados obtenidos al utilizar como una herramienta diagnostica, técnicas moleculares de PCR-RFLPs sobre la subunidad ribosomal 18S del DNA del Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi y Trypanosoma theileri pertenecientes al Banco de Germoplasma de hemoparásitos de Corpoica, las cuales fueron multiplicadas en ovinos de lana y purificadas por cromatografía de intercambio iónico. Con la PCR semianidada se obtuvieron los primeros amplificados entre 700-800 pb y de 600¬700 pb en la segunda amplificación. Usando las enzimas de digestión MspI y Eco57I se obtuvieron diferentes perfiles diferenciando las infecciones por Trvpanosoma vivax, Trypanosoma evansi y Trypanosoma theileri. Las 70 muestras de sangre de ganados del Piedemonte Llanero, colectadas por el metodo del Buffy coat, fueron reportados como negativos a Trypanosoma con pruebas parasitológicas, pero con la PCR se detectaron positivos a Trypanosoma el 7.14% de animales, con niveles de sensibilidad de la prueba de 25 trypanosomas/ml de sangre parasitada. Los patrones de digestión obtenidos correspondieron a la cepa Trypanosoma theileri en un 80%, y un 20% a la cepa Trypanosoma vivax. Los resultados morfometricos en las especies T.vivax y T.evansi mostraron que el T.vivax es un parasito con mayor longitud (20-25 [tm) que el T. evansi (18-19 um), aunque el flagelo libre de este ultimo siempre fue mayor ( 7-9 um) al igual que el diámetro del tarde. En ambos parásitos la posición del nixie fue central y la posición del quinetoplasto terminal.